Applicazione del laparoscopio veterinario nella raccolta di ovociti bovini fecondazione in vitro
Applicazione del laparoscopio veterinario nella raccolta di ovociti bovini fecondazione in vitro.
Il tasso di recupero degli ovociti raccolti con la tecnica laparoscopica è più semplice di quello della raccolta degli ovuli direttamente dall'ovaio. Inoltre, la laparoscopia veterinaria può essere utilizzata per controllare lo sviluppo follicolare.
Inserimento del laparoscopio: inserire il trocar smussato nella cannula, inserire la cannula nella vagina, posizionare l'estremità anteriore della cannula nella posizione predeterminata della volta vaginale attraverso la presa rettale, quindi ritirare il trocar smussato, inserire il trocar piramidale e regolare l'angolo. Fare la direzione del trocar e dell'asse longitudinale della vacca leggermente verso destra con un angolo di 10° e penetrare con forza verso l'alto nella volta vaginale. Se la resistenza diminuisce improvvisamente, indica che la volta vaginale è stata perforata. A questo punto, estrarre il trocar. Quando si sente il suono dell'aria che entra e la mano che tiene il retto sente allo stesso tempo l'espansione della cavità addominale, indica che la posizione del piercing è corretta. La guaina in acciaio inossidabile con il cilindro dell'endoscopio è inserita nel manicotto. Secondo la sensazione del retto, se la cavità è piccola, deve essere riempita con un po' di CO2. La velocità della presa d'aria dovrebbe generalmente essere controllata a 7~L/min. La quantità di gas riempita dipende dalle dimensioni della mucca."Generalmente, è circa 9L.
Raccolta di ovociti: l'operatore della presa rettale dovrebbe regolare costantemente la posizione del laparoscopio e dell'ovaio e visualizzare la forma dei follicoli e del corpo luteo in diverse posizioni sull'ovaio, al fine di determinare i follicoli che devono essere perforati. Un assistente acquisisce la password dell'operatore e il follicolo visualizzato sullo schermo in base al retto, aziona l'ago di puntura, raccoglie il liquido follicolare e inserisce il liquido follicolare nel tubo di raccolta a cui è stata aggiunta una piccola quantità di liquido di coltura. Un altro assistente è responsabile del funzionamento della pompa per vuoto a pedale. Per prevenire la perdita di ovociti, la pompa a vuoto deve essere avviata (la pressione negativa deve essere di 100 mm Hg) prima della puntura. Dopo la raccolta, il liquido follicolare viene posto nel portaprovette per 5-10 minuti, e il fluido follicolare sul fondo del tubo di raccolta viene aspirato nella piastra con una cannuccia e quindi osservato al microscopio ottico. E gli ovociti rilevati vengono risucchiati nel tubo sottile. Le due estremità del tubo sottile sono sigillate e gli ovociti possono essere trasportati al laboratorio per la coltura matura. Al termine dell'operazione, viene estratta la canna dell'endoscopio e i due assistenti premono su entrambi i lati della parete addominale della mucca per espellere il gas nella cavità addominale. Quando il gas non viene più scaricato, la cannula viene estratta e la vagina viene controllata a giorni alterni per prevenire l'infezione. Le due estremità del tubo sottile sono sigillate e gli ovociti possono essere trasportati al laboratorio per la coltura matura. Al termine dell'operazione, viene estratta la canna dell'endoscopio e i due assistenti premono su entrambi i lati della parete addominale della mucca per espellere il gas nella cavità addominale. Quando il gas non viene più scaricato, la cannula viene estratta e la vagina viene controllata a giorni alterni per prevenire l'infezione. Le due estremità del tubo sottile sono sigillate e gli ovociti possono essere trasportati al laboratorio per la coltura matura. Al termine dell'operazione, viene estratta la canna dell'endoscopio e i due assistenti premono su entrambi i lati della parete addominale della mucca per espellere il gas nella cavità addominale. Quando il gas non viene più scaricato, la cannula viene estratta e la vagina viene controllata a giorni alterni per prevenire l'infezione.
Precauzioni:
1. Anestesia: né troppo superficiale né troppo profonda. Un'anestesia efficace è un prerequisito per il completamento della puntura follicolare per ottenere gli ovociti. Se l'anestesia è troppo superficiale, la mucca sentirà dolore e influenzerà l'accuratezza dell'operazione e l'anestesia dovrebbe essere integrata. Se l'anestesia è troppo profonda, la mucca non starà in piedi stabilmente, o addirittura si sdraierà, il che influenzerà anche l'operazione. Se la vacca è distesa, l'operazione deve essere interrotta immediatamente e la cannula e il tubo laparoscopico devono essere ritirati rapidamente. Allo stesso tempo, si dovrebbe prestare attenzione a rilasciare il Baoding in tempo per evitare lesioni alla mucca.
2. Puntura: la pinza rettale deve afferrare correttamente l'angolo di puntura durante la perforazione della volta vaginale per evitare di perforare il retto e l'intestino crasso. Quando si fora il follicolo, l'ago non deve essere forato troppo in profondità, altrimenti danneggerà la sostanza ovarica e causerà un'emorragia. Ciò non solo contaminerà il liquido follicolare, influenzerà il rilevamento degli ovociti, bloccherà gli aghi e i dotti, ma influenzerà anche lo sviluppo dei follicoli sull'ovaio. recuperare. In caso di sanguinamento, la puntura del follicolo deve essere interrotta immediatamente, l'ago e il catetere e il tubo di raccolta devono essere sostituiti e l'ago e il catetere devono essere lavati con 0,01 mg di eparina/ml prima della successiva puntura del follicolo.
3. Raccolta del liquido follicolare: il liquido follicolare raccolto deve essere mantenuto il più possibile a temperatura costante. È meglio rilevare gli ovociti subito dopo la raccolta e metterli in un terreno di coltura maturo contenente FSH, confezionarli in tubi sottili e trasportarli in laboratorio, generalmente da Il tempo dalla raccolta all'incubatrice per la maturazione della coltura non deve superare le 4 ore.
4. Competenze: L'uso di successo di questo metodo richiede non solo una buona attrezzatura, ma richiede anche che l'operatore abbia un alto livello di conoscenza e competenza nelle operazioni pratiche, nonché una stretta collaborazione con due assistenti. Pertanto, la formazione necessaria deve essere effettuata prima dell'operazione sperimentale.
Inoltre, questo metodo può essere utilizzato anche per ottenere in anticipo ovociti da giovani vacche, aumentando così il periodo di utilizzo e il potenziale riproduttivo delle vacche e accelerando il progresso genetico. Questo metodo sarà un buon modo per ottenere fonti di uova dopo la superovulazione e l'uso di ovaie isolate.
